染色质由组蛋白和DNA组成,——147个碱基对的DNA缠绕在8个组蛋白(由H2A、H2B、H3和H4形成的八聚体)周围,形成基本的染色质单位,即核小体。核小体像珠串一样串连在一起,并被包装成更高阶的染色质结构。DNA带负电荷,富含碱性氨基酸的组蛋白带正电荷,且组蛋白多聚物有很多疏水区段。所有这些特点导致宿主DNA残留(HCD)能吸附很多物质,包括宿主蛋白残留(HCD)、色谱填料、目的病毒颗粒等,因此,HCD的存在增加了工艺流程的复杂度,同时也降低了病毒颗粒的稳定性。中盐核酸酶具有纯度高(≥99%)、 内毒水平低(<0.25EU/1kU)的特点;湖北M-SAN中盐核酸酶70950-202
在传统生物技术行业(如抗体、疫苗领域)使用的下游纯化工艺步骤,已经用于慢病毒的大规模下游处理。主要是基于膜(过滤/澄清,利用切向流过滤TFF进行浓缩/渗滤,基于膜的色谱)和色谱(离子交换色谱IEC,亲和色谱AC,体积排阻色谱SEC)的技术。这些不同的过程步骤的组合是可变的,在某些情况下,不同的纯化方法可以用于相同的目的。此外,采用benzonase/M-SAN HQ中盐核酸酶降解污染的DNA或者用于下游的一个步骤,或者用于病毒生产阶段。云南等渗条件中盐核酸酶70950-160M-SAN HQ ELISA kit检测产品灵敏度高,定量范围为0.12-7.5ng/ml。
M-SAN HQ中盐核酸酶在生理盐条件下的优势,让其成为生物生产工艺中去除核酸污染的更好选择。经过多年的市场宣传,M-SAN HQ中盐核酸酶品质已得到多个全球TOP CDMOs认可,纳入其工艺开发筛选平台。此外,目前全球有10+临床项目涉及的病毒载体生产用到M-SAN HQ中盐核酸酶。对于同一个项目,用M-SAN HQ替代Benzonase全能核酸酶,酶量减少、HCD去除效果更优、病毒载体产量也有一定程度的提高,酶相关成本降为原有的1/5以内,极大降低了病毒载体生产成本。
ArcticZymes Technologies于2019年推出了M-SAN HQ中盐核酸酶,2021年推出对应的M-SAN HQ ELISA kit。该试剂盒原理是采用双抗夹心法定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中M-SAN HQ中盐核酸酶的残留含量,特异性的anti-M-SAN作为捕获抗体偶联在孔板上,辣根过氧化酶HRP标记anti-M-SAN作为检测抗体,TMB是检测反应底物。该试剂盒特异识别M-SAN HQ中盐核酸酶,对其它核酸酶没有特异性结合。它的定量范围是0.12-7.5ng/ml;12*8strips的设计规格,使用灵活,更能降低使用成本。在细胞培养液或收获的培养上清中,不需调整任何组分,M-SAN HQ中盐核酸酶即可表现较高核酸酶活性。
细胞基因药物的基因递送有病毒及非病毒两种方式,其中病毒递送更为常用。在病毒递送路径中,腺相关病毒(AAV)和慢病毒(Lentivirus)是常用的两种载体;差别是病毒基因组的存在形式,AAV的基因组一般不整合到染色体中,以游离形式存在于染色体之外,且一般会表达数年之久;而慢病毒的基因组则会整合到染色体达到长期持续表达的目的。此外,其它用于基因药物的病毒载体有单纯疱疹病毒(HSV)、痘苗病毒(Vaccina Virus)、痘病毒(Poxviruses)。生理盐浓度下,M-SAN HQ中盐核酸酶性能优于常用核酸酶。ArcticZymes中盐核酸酶70950-202
M-SAN HQ中盐核酸酶是用Pichia pastoris表达的重组非特异内切核酸酶。湖北M-SAN中盐核酸酶70950-202
一般来说,生物生产工艺用的核酸酶以BenzonaseTM(BenzonaseTM是Merck的注册商标)为主,能高效降解任何形式(双链、单链、线状、环状)的DNA和RNA。该酶来自于大自然界普遍存在的S.Marcescen,通过E.coli发酵生产得到。该酶的适宜反应条件是低盐浓度范围(<100mM盐浓度),且酶活随着盐浓度上升而下降,在300mM盐浓度时酶活几乎丧失。对于细胞基因药物常用的两种病毒载体LV和AAV,LV由于含有脂包膜结构一般都在生理盐条件下存在,而AAV在高盐条件下不易团聚、更稳定。而在生理盐浓度及更高浓度条件下,Benzonase活性受到抑制。湖北M-SAN中盐核酸酶70950-202
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