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支原体基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 型号
  • CM0001
支原体企业商机

预防细胞培养过程中的支原体污染至关重要,因为一旦发生污染,可能会严重影响实验结果和细胞的生长。以下是一些有效的预防措施:
1. 无菌操作:始终在无菌条件下进行细胞培养操作,包括使用无菌的移液器、手套和其他实验室器材。
2. 个人防护:穿戴适当的个人防护装备,如实验服、手套和口罩,以减少污染的风险。
3. 细胞培养室的清洁:保持实验室和细胞培养室的清洁,定期进行消毒处理。
4. 培养箱的维护:定期清洁和消毒CO2培养箱,避免飞溅和溢出,并维持严格的清洁计划。
5. 使用无支原体污染的试剂:使用经过检测确认无支原体污染的培养基、血清和其他添加物。
6. 细胞的检测:定期对细胞进行支原体污染的检测,尤其是在引入新的细胞系或传代细胞之前。
7. 培养基和试剂的过滤:使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤所有细胞培养用液体,以阻止支原体的通过。
8. 使用抗*素预防:虽然抗*素不能作为常规预防手段,但在某些情况下,可以考虑使用抗*素作为预防措施,尤其是在高风险操作中。
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支原体污染和黑胶虫污染是两种不同类型的细胞培养污染,它们具有各自的特点和区别:
支原体污染:在相差显微镜下,支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。
黑胶虫污染:在高倍镜下,被黑胶虫污染的细胞膜会变得模糊不清,边界不清晰,有粗糙感。

污染的影响:
支原体污染:可能导致细胞增殖缓慢,甚至从培养器皿脱落,影响细胞的DNA、RNA及蛋白表达。
黑胶虫污染:与细胞竞争性生长,开始时对细胞没有什么影响,但当数量多时,细胞生长会受到影响直至死亡。

污染的来源:
支原体污染:可能来源于工作环境的污染、操作者本身、培养基的污染、交叉污染、实验器材带来的污染以及用来制备细胞的原始组织或部位的污染。
黑胶虫污染:可能来源于细胞本身的污染或从动物取材时的污染,也可能通过培养箱空气进行污染。
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支原体去除试剂使用后,对支原体的检测可能会有影响。一些支原体去除试剂通过特异性地与支原体膜结合、改变支原体膜的通透性来杀死支原体,而对真核细胞几乎没有影响。然而,某些情况下,去除试剂可能会对细胞的活力和形态产生一定的影响,尤其是在去除剂作用期间。此外,如果去除剂的效果不彻底,可能会导致细胞再次被支原体污染。

需要注意的是,某些支原体去除试剂可能会在去除支原体的过程中导致支原体膜溶解,从而释放出支原体的DNA,这可能会在随后的支原体核酸检测中引起假阳性结果。因此,在去除支原体后,建议在继续正常传代培养几代细胞后再进行支原体检测,以确保检测结果的准确性。

目前有 210 +种不同种类的支原体分布于人类、动物、昆虫和植物中,其中 20 +种在细胞培养中被发现为污染物。支原体在实验室中的传播来源多种多样,主要来源包括实验室人员、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由猪来源的胰蛋白酶溶液。此外,来自其他实验室或商业供应商的细胞培养物、培养基、污染的试剂;非无菌供应品、培养基和溶液;实验室人员;培养箱;液氮;空气颗粒和气溶胶;抗*素的过度使用;细胞培养器皿的不正确密封;以及其他的支原体细胞培养物等都可能成为支原体的传播途径。
支原体去除试剂使用之后,对支原体的检测是否有影响?

一步法快速支原体检测的原理主要基于等温扩增技术,这是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法。以下是具体的步骤和原理:

1. 等温扩增技术:一步法快速支原体检测试剂盒利用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification,环介导等温扩增)技术或类似的等温扩增技术。这些技术允许在恒定温度下进行DNA的快速扩增,通常在60-65°C之间。
2. 特异性引物:该方法使用设计好的特异性引物,这些引物靶向支原体DNA的保守区域。引物的设计确保了扩增过程的特异性,从而减少非目标序列的扩增。
3. 快速扩增:在适宜的条件下,等温扩增技术可以在15至60分钟内实现高达10^9至10^10倍的核酸扩增,从而快速检测出支原体的存在。
4. 颜色变化指示:一步法试剂盒中通常包含有颜色指示剂,当支原体DNA被扩增时,反应液的颜色会发生变化,从而可以通过肉眼直接观察到检测结果。例如,从蓝紫色变为天蓝色,表示样本中存在支原体。
5. 操作简便:一步法支原体检测不需要复杂的设备,通常只需要水浴锅或PCR仪即可完成操作,使得检测过程更加简便快捷。
为什么要去除支原体?杭州细胞培养支原体检测方法

对于同一个样品,为什么PCR结果为阳性,而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性?深圳细胞培养支原体去除试剂价格

细胞培养中支原体污染的检测方法有多种,以下是一些常用的检测手段:

1. 显微镜检测:通过相差显微镜观察细胞,支原体在细胞表面和细胞之间会呈现为暗色微小颗粒。
2. 荧光染色法:使用荧光染料Hoechst 33258与DNA特异性结合,使支原体的DNA着色,然后在荧光显微镜下观察。染色后的支原体会在细胞周围或附于细胞膜表面显示为亮绿色小点。
3. 电镜检查:使用扫描电镜或透射电镜观察,这是一种简便快速的方法。
4. 聚合酶链反应(PCR):使用特定的引物对支原体DNA进行扩增,是一种高灵敏度的检测方法。
5. 等温扩增法:基于LAMP技术,室温反应后观察颜色变化确认是否有支原体污染。
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