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免疫组化基本参数
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免疫组化企业商机

免疫组化如何才能充分脱蜡?

 (1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短; 

(2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长。

(3)当天切的切片,烧烤2小时后进行染色,切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程,如果预先切好烤好的切片,在染色前,还必须对切片进行加温10-20分钟,然后再行脱蜡,这样脱蜡速度加快,效果魁伟更好。总之,操作时应根据不同的季节,不同的室温,不同的试剂来决定,脱蜡的时间,原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。

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免疫组化在什么情况下进行组织抗原修复,抗原修复的条件是什么? 

(1)由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性。通过抗原修复,使得细胞内抗原决定族重新暴露,提高抗原检测率。

(2)修复方法从强到弱一般分为三种,高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种(具体的可以查阅相关资料,大量的:中性的、高pH的等)。

(3)微波修复,我们一般用6min*4次,效果不错。

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免疫组化临床应用中,可以对传染性疾病诊断。应用抗病毒、细菌、zhen菌和寄生虫抗原的特异性抗体进行免疫组化染色,可以检测和诊断许多传染性疾病病原微生物,如乙型肝炎病毒(HBV)、巨细胞病毒(CMV)、人乳T状瘤病毒(HPV)、疱疹病毒(HSV)、丙型肝炎病毒(HVC)、细小病毒B19、人禽流行性感冒病毒(AIV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS)等等,由于免疫组化在传染性疾病诊断中具有及时性、低风险性、高敏感性、特异性、有效性等特点,可以用于(1)用于人类新病原微生物的识别;(2)提供快速的形态学诊断,使严重传染性疾病得以早期医疗;(3)在无法取得新鲜组织或尚无培养方法的情况下,提供诊断并对发病机制进行研究和认识。英瀚斯生物专业做实验外包服务,一站式医学科研平台。

免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性,无阳性信号,假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有:(1)抗原修复方法选择不当,根据不同的抗原特点采用不同的修复方法,大多数抗体要求热修复,热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复;而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化,如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin则不用修复;(2)一抗本身的问题:一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊,进而影响临床诊断及延误医疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照,比较两者染色结果。若阳性对照有表达,表明试剂和染色体系及实验步骤均无问题;若阳性对照无表达,则检测过程中某一试剂或某个步骤存在问题,应逐一查找原因。如何做好免疫组化实验?

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免疫组化实验所用的抗体

免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

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免疫组化常用的染色方法

根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。 免疫组化结果分析是什么?山西做得好的免疫组化哪家好

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免疫组化实验所用的组织和细胞标本是什么样的?

实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先的组织标本制作方法。

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