高效液相色谱分离原理
离子交换
(Ion-exchange Chromatography)
IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流
动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下：
X-（溶剂中） (树脂-R4N Cl-)=== （树脂-R4N X-) Cl- （溶剂中）
当交换达平衡时：
KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-]
分配系数为：
DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-]
[讨论：DX与保留值的关系]
凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。
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高效液相色谱仪的构造：
高效液相色谱系统主要是由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录仪组成的，高效液相色谱系统的整体组成类似于气相色谱，但是针对高效液相色谱系统流动相为液体的特点作出很多的调整。高效液相色谱的输液泵要求输液量恒定平稳，进样系统要求进样便利、切换严密。同时，由于液体流动相黏度远远高于气体，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。 新疆赛默飞世尔液相色谱系统采购全新 Thermo Scientific™ Vanquish™ Duo UHPLC 系 统专为您轻松提**析效率。
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液相色谱类型
液相色谱按其分离机理，可分为四种类型--吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱、凝胶色谱法
分配色谱法
这种色谱的流动相和固定相都是液体，样品分子在两个液相之间很快达到平衡分配，利用各组分在两相中分配系数的差异进行分离，类似于萃取过程。
一般常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG400～4000)、三甲撑乙二醇(TMG)和角鲨烷(SQ)。采用与气相色谱(GC)同样的方法，将固定液涂渍在多孔的载体表面，但在使用中固定液易流失。目前，应用较多的是键合固定相。在这种固体相中，固定液不是涂在载体表面，而是通过化学反应在纯硅胶颗粒表面键合上某种有机基团。
例如，利用氯代十八烷基硅烷与硅胶表面的羟基(-OH)之间的反应就可以形成一烷基化表面。这种固定液的优点是不易被流动相剥蚀。在分配色谱法中，流动相可为纯溶剂，也可以采用混合溶剂进行梯度淋洗，其极性应与固定液差别大一些，以避免两者之间相溶。通常可分为正相分配和反相分配。
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高效液相色谱相关术语
峰面积(peak area，A)—峰与峰底所包围的面积。
保留时间(retention time，tR)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
理论塔板数(theoretical plate number，N)——用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。
分离度(resolution，R)——相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。R≥1.5称为完全分离。
《中国药典》规定R应大于1.5。
拖尾因子(tailing factor，T)——T=，用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。
《中国药典》规定T应为0.95~1.05。
T1.05为拖尾峰。
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