Recombinant Cynomolgus CTLA-4/CD152 Protein

T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因编辑中的应用主要体现在突变体检测和基因编辑效率评估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具体应用步骤和特点：1.**基因编辑效率评估**：-T7EI用于评估CRISPR-Cas9在给定的导向RNA靶位点上对细胞群体进行基因编辑的效率。-通过PCR扩增围绕CRISPR导向RNA靶位点的基因组DNA，如果CRISPR-Cas9介导的非同源末端连接（NHEJ）修复事件引入了突变，变性和退火将形成突变型和野生型PCR扩增子的异源双链DNA。2.**突变体检测**：-如果CRISPR/Cas9编辑成功在DNA上引入突变，则可与野生型DNA片段退火产生异质双链DNA。T7EI可以识别该DNA上的不完全配对的DNA位点然后进行双链切割，通过琼脂糖凝胶电泳即可显示酶切后的条带，从而半定量判定基因编辑效果。-T7EI能识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA，不能识别1bp的插入、缺失或突变。3.**实验步骤**：-收集细胞并提取基因组DNA，然后使用PCR扩增期望编辑的基因组区域。扩增子的长度建议为0.5-1kb。-对扩增的DNA进行变性和退火复性，以产生异质双链DNA。-使用T7EI酶处理退火后的DNA产物，在37℃孵育15分钟。

核酸内切酶VIII（EndonucleaseVIII）和核酸内切酶III（EndonucleaseIII）都是DNA修复酶，但它们之间存在一些关键的区别：1.**活性类型**：-**核酸内切酶VIII**：具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。N-糖基化酶活性可以释放受损的嘧啶碱基，如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇，产生一个脱嘌呤(Apurinic,AP)位点；AP裂解酶活性可以切割AP位点的3'和5'端，产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口(Gap)。-**核酸内切酶III**：主要具有β裂解酶(β-lyase)活性，能够切割DNA磷二酯骨架在AP位点处，但不具备δ裂解酶(δ-lyase)活性。2.**识别和切除的受损碱基**：-**核酸内切酶VIII**：可以识别并切除包括尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲在内的多种受损碱基。-**核酸内切酶III**：主要识别和切除氧化性损伤的嘌呤碱基，如8-氧鸟嘌呤。3.**裂解酶活性**：-**核酸内切酶VIII**：具有β和δ裂解酶活性，而**核酸内切酶III**具有β裂解酶活性。这些区别决定了它们在DNA损伤修复中的作用和应用范围。

在现代分子生物学研究中，聚合酶链式反应（PCR）技术已成为不可或缺的工具，广泛应用于基因扩增、突变检测、基因表达分析等多个领域。而一款PCR Master Mix则是确保实验成功的关键因素之一。Phusion Master Mix (2×) (Without Dye)凭借其性能和独特的产品特点，为科研工作者提供了高效、可靠的实验解决方案。一、酶性能Phusion Master Mix的成分是Phusion DNA聚合酶，这是一种具有高保真性的热稳定酶。它能够以极高的准确性复制DNA模板，错误率极低，为普通Taq酶的1/500，这使得它在扩增长片段DNA或对序列准确性要求极高的实验中表现出色。例如，在进行基因克隆或构建基因文库时，Phusion酶能够确保扩增产物的序列与原始模板高度一致，从而提高了后续实验的成功率。二、快速扩增能力尽管Phusion酶具有高保真性，但其扩增速度并未受到影响。它能够在短时间内完成长片段DNA的扩增，提高了实验效率。对于长度在5kb以内的DNA片段，Phusion Master Mix可以在几分钟内完成扩增，这对于需要快速获得实验结果的研究人员来说是一个巨大的优势。例如，在进行高通量基因筛查或大规模样本分析时，Phusion Master Mix能够缩短实验周期，提高工作效率。

高灵敏度与特异性该试剂盒采用优化的缓冲体系和新一代TaqDNA聚合酶，结合高效的逆转录酶，能够在低浓度RNA样本中实现高灵敏度的检测。其特异性高，即使在复杂的样本中，也能通过熔解曲线分析呈现单一峰，避免非特异性扩增。防污染设计OneStepRT-qPCRSYBRGreenKit(UDGPlus)内置dUTP/UDG防污染系统，能够有效降解含有尿嘧啶的PCR产物，防止实验室气溶胶污染对实验结果的干扰。这一特性在病毒检测和低丰度基因表达分析中尤为重要。操作简便该试剂盒将逆转录和qPCR反应整合在同一管中完成，避免了多次开盖操作，减少了人为误差和污染风险。同时，预混液的设计使得实验操作更加便捷，用户只需加入引物和模板即可进行反应。示踪染料辅助试剂盒中的反应缓冲液含有惰性示踪染料，通过颜色变化（如蓝色与黄色混合后变为绿色）直观判断样本是否加入，提高了实验操作的准确性和可靠性。兼容性该试剂盒适用于多种qPCR仪器，并提供不同浓度的ROX校正染料，以满足不同仪器的需求。Pfu DNA Polymerase在基因克隆中的应用：Pfu DNA Polymerase常用于基因克隆，确保DNA片段的高精度复制。

BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶在分子生物学实验中都是常用的酶，但它们之间存在一些关键的不同点：1.**来源和热稳定性**：-**TaqDNA聚合酶**来源于嗜热菌Thermusaquaticus，具有很好的耐热性，能够承受PCR的热变性步骤。-**BstDNA聚合酶**来源于嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillusstearothermophilus），同样具有较高的热稳定性，适用于等温扩增，如LAMP技术，无需PCR热循环。2.**酶活性**：-**TaqDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'外切酶活性，但没有3'-5'外切酶活性。这意味着它在DNA合成过程中可以校正一些错误，但保真性相对较低。-**BstDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和强链置换活性，但缺乏5'-3'外切酶活性。这使得它在等温扩增中更为有效，尤其是在需要高保真度和快速扩增的应用中。3.**应用领域**：-**TaqDNA聚合酶**主要用于PCR技术，适用于各种DNA片段的扩增，包括复杂模板和长片段的扩增。-**BstDNA聚合酶**特别适用于等温扩增技术，如LAMP，这些技术不需要温度循环，适用于快速、低成本的DNA扩增。4.**扩增速度和效率**：-**BstDNA聚合酶**在等温扩增中显示出比传统TaqDNA聚合酶更快的扩增速度和更高的产量，尤其是在优化的LAMP反应中。

Endo H 的活性受 pH 值的强烈影响，通常在酸性条件下表现出好的活性，一般合适 pH 范围在 5.0-6.0 左右。Recombinant Cynomolgus CTLA-4/CD152 Protein,His Tag

SYBR Green I核酸染料10000×：性能助力科研突破SYBR Green I是一种广泛应用于核酸分析的荧光染料，以其性能和安全性在科研领域备受青睐。其10000×高浓度配方为实验提供了更高的灵活性和便利性。高灵敏度与特异性SYBR Green I是一种高灵敏度的dsDNA荧光染料，能够与双链DNA的小沟结合，荧光信号增强800-1000倍。在qPCR等实验中，其检测灵敏度可达20 pg DNA，比传统溴化乙锭（EB）染色高出25-100倍。这种高灵敏度使其在低拷贝数的核酸检测中表现出色，尤其适用于珍贵样本的分析。安全与环保与传统的EB染料相比，SYBR Green I属于花青类染料，无致病性，使用更加安全环保。这一特性使其成为实验室中理想的替代品，尤其适合频繁接触染料的研究人员。广泛的应用场景SYBR Green I适用于多种科研应用，包括凝胶电泳、qPCR、等温扩增、流式细胞术以及精子膜完整性评估等。在凝胶电泳中，它支持预染和后染两种方法，操作简便，无需脱色或冲洗。此外，其在qPCR中的表现也十分出色，能够提供准确的定量结果。Recombinant Cynomolgus CTLA-4/CD152 Protein,His Tag