GalactEXO中的酶来源于Akkermansia muciniphila,并在大肠杆菌中表达。GalactEXO由两种半乳糖苷酶组成,均带有His标签,组分的分子量为87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的冻干酶。Genovis的GalactEXO 冻干剂以冻干粉的形式提供,装在 2000 单位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-连接的半乳糖。1. 用于方法开发的灵活格式;2. 可以结合酶以提高效率; 3. 适用于自动化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!将混合物加载到GlycOCATCH上,洗涤树脂,并用8M尿素洗脱结合的肽。纯化后,在RP-LC-MS上分离样品。数据显示,糖苷酸肽的选择性纯化,携带he心1-O-聚糖。IgA 特异性 O-糖肽富集:IgA 抗体包含 N-连接的糖基化和重度 O-糖基化的铰链区域。胰蛋白酶消化IgA后,将肽和genovis 的SialEXO的混合物加载到GlycOCATCH树脂上,并用PBS和离心洗涤。用 8 M 尿素洗脱显示预期的 O-糖基化铰链肽富集,具有不同程度的糖基化。使用 GalactEXO 冻干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的转变。云南PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
Genovis的PNGase F 是一种糖酰胺酶,可水解多肽天冬酰胺与所有哺乳动物天冬酰胺连接复合物、杂交体或高甘露糖寡糖的内层 GlcNAc 之间的酰胺键。 在反应过程中,从中去除聚糖的天冬酰胺残基被脱酰胺为天冬氨酸。释放的低聚糖完好无损,可用于进一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的样品制备,以降低蛋白质的异质性,使游离的糖分析成为可能,并研究N-糖的功能作用。 该酶在大肠杆菌中表达,该重组基因来源于伊丽莎白金氏脑膜败血症。 评价抗体片段对完整蛋白聚集的影响。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生产。 mAb1被糖基化,主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦双触角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。陕西PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用:共同提供了有关聚糖组成和 O-聚糖位点的完整信息。
Genovis的SialEXO固定化用于复杂糖蛋白的去唾液酸化:在设置反应条件时,需要在所需的反应时间和完成反应所需的酶量之间进行权衡。较高的酶量可保证在更短的时间内完成周转,但会使下游分析复杂化。为了避免此类问题,我们以离心柱形式固定了活性SialEXO。这允许以更短的孵育时间孵育具有明显更高量的唾液酸酶的糖蛋白底物。Genovis测试了 SialEXO 冻干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制剂上的性能。这种糖蛋白是一种具有挑战性的底物,具有 6 个 N- 和多达 26 个 O-聚糖,由 α2,3 和 α2,6 连接的唾液酸修饰。对游离的N-聚糖的分析表明,SialEXO在溶液中完全脱唾液酸化,SialEXO固定化。
genovis分析依那西普和曲妥珠单抗游离聚糖:为了确认依那西普和曲妥珠单抗中半乳糖损失的LC-MS数据,进行了释放的N-聚糖分析。标记的N-聚糖的分离清楚地表明了依那西普和曲妥珠单抗上半乳糖的丢失,如半乳糖基化聚糖物种的信号丢失所示。该酶是一种有价值的工具,可降低样品异质性,用于分析携带α连接的 GalNAc 残基作为未成熟截短he心 1 的复杂 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-连接的 GalNAc;2. 实现完全糖基去除,以改善蛋白质表征;3. 可固定在即用型离心柱中。用于糖蛋白去唾液酸化的冻干酶混合物SialEXO 冻干剂以冻干粉的形式提供,装在 2000 个单位的小瓶中。
GlycOCATCH设计用于特异性结合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。亲和树脂基于无活性的Genovis的OpeRATOR酶,该酶经过工程设计,可以高亲和力结合O-糖基化蛋白和肽。 结合在pH 5-8的生理缓冲液中进行。由于GlycOCATCH树脂和O-糖蛋白/肽之间的强相互作用,可以用8M尿素进行洗脱。或者,可以使用活性OpeRATOR酶进行洗脱,该酶消化O-聚糖位点的N末端结合的O-糖蛋白。在后一种情况下,肽在天然条件下回收。OpeRATOR 冻干酶包含在购买中。由于 O-糖蛋白上的旋亚氨酸化 O-聚糖与树脂结合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 冻干也包含在购买中。依那西普和曲妥珠单抗游离聚糖。陕西PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究
用于糖蛋白的去氟糖基化,而不会用酶污染z终制剂。云南PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
生成携带 O-糖的糖肽,该酶可实现 O-糖谱分析、O-糖肽图谱和位点占用测定,以及使用 MS 分析的中级方法。1.可靠O-聚糖特异性蛋白酶 – 消化丝氨酸/苏氨酸糖基化位点的 N 末端;2.稳健的消化,增强复杂生物制药的表征;3.高特异性 - 可靠的聚糖位点测定和定位。Genovis的OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶,可消化携带he心1 O-聚糖的蛋白质,糖基化(he心 1)Ser 和 Thr 残基的 N 端。OpeRATOR 来源于 Akkermansia muciniphila,并以 E 表达。大肠杆菌。该酶含有 His 标签,分子量为 42 kDa。SialEXO 来源于 Akkermansia muciniphila,并以 E 表达。大肠杆菌。SialEXO Lyophilized 中的酶也含有 His 标签,这些组分的分子量分别为 43 kDa 和 66 kDa。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽的冻干酶。Genovis的OpeRATOR 冻干剂以冻干粉末的形式提供,装在 2000 个单位的小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。云南PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
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