羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）是一种不能轻易穿过生物膜的缓冲。 它适用于伊立替康脂质体，因为它可以在稳定脂质体外水相酸碱度为弱碱性的情况下，不改变内水相酸性酸碱度。HEPES 的用量应该在10-25mM 之间，10mM以下的用量会导致缓冲能力较弱， 25mM以上可能对一些细胞造成不良反应。HEPES的使用以及操作应尽量在避光的情况下进行。这是因为在灯光下，HEPES会产生H2O2，而H2O2对活性的物体来说是有害的，这对培养的细胞会造成一定的伤害。
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HEPES在细胞培养中发挥作用的主要原理是基于其两性离子特性和稳定的缓冲能力。以下是具体解释：稳定的缓冲能力***的pH缓冲范围：HEPES的有效缓冲范围在pH6.88.2之间，覆盖了大多数细胞生长所需的pH环境（pH7.27.4）。这使得HEPES能够在细胞培养过程中提供稳定的pH环境，有利于细胞的生长和繁殖。CO2无关性：与许多其他缓冲液不同，HEPES的缓冲能力不受CO2浓度的影响。这意味着在开放式培养或细胞观察时，即使培养基脱离了5%CO2的环境，HEPES也能维持pH的稳定，防止pH迅速升高。安徽有登记号HEPES使用注意事项注射用HEPES缓冲体系；
HEPES是一种两性离子缓冲剂。HEPES分子中的磺酸基（-SO3H）和叔胺氮共同构成了缓冲对。磺酸基具有较强的酸性，可以释放出H+；而叔胺氮则具有碱性，可以接受H+生成季铵盐。这两个部分之间可以相互转移H+或OH-，从而建立起平衡的缓冲体系。在HEPES缓冲溶液中，当有外来酸或碱添加进来时，磺酸基和叔胺之间的转移平衡会发生变化，从而抵消外界酸碱物质的影响，使溶液的pH保持相对稳定。这种平衡转化关系可以通过下图来表示：HEPES⇌HEPESH++OH-HEPES⇌HEPES-+H+HEPES⇌HEPESH2++OH-HEPES⇌HEPES2-+2H+这些平衡反应使得HEPES能够在一定范围内调节溶液的pH值，一般在6.8到8.2之间。此外，HEPES缓冲溶液的浓度以及环境温度对其pH值的影响较小，因此能够保持较长时间的稳定pH值。总的来说，由于HEPES分子中的磺酸基和叔胺氮之间的平衡转化关系，HEPES可以作为一种有效的两性离子缓冲剂，在生化实验和生产过程中稳定溶液的酸碱度。
使用注意事项pH调节：在配制HEPES溶液时，需要准确调节pH值至适合细胞生长的范围内。浓度控制：根据实验需求和细胞类型，严格控制HEPES的浓度，避免过高或过低。一般来说，HEPES的使用终浓度为10~50mmol/L，其中20mmol/L HEPES足以满足大多数细胞培养的缓冲需求。避光操作：由于HEPES暴露于光线中时会产生过氧化氢，对培养的细胞或其他有生物活性的物体产生毒性，因此HEPES作为缓冲液的操作应尽量在避光条件下进行。与其他成分的兼容性：在配制细胞培养基时，需要注意HEPES与其他成分的兼容性。长期稳定性：配制好的HEPES溶液需要存放在适当的温度下，确保其长期稳定性。综上所述，HEPES作为一种高效、稳定的缓冲液，在细胞培养和其他生物化学研究中发挥着重要作用。通过合理控制HEPES的浓度和配制方法，可以维持细胞培养环境的pH稳定，提高细胞的生长和代谢效率。国产注射用HEPES缓冲液CDE已登记状态为A采购；
HEPES缓冲体系的应用
2022年4月15日，施维雅公司（SERVIER）宣布，其胰腺****药物易安达（通用名：盐酸伊立替康脂质体注射液）获得中国国家药品监督管理局（NMPA）正式批准上市。
伊立替康**早上市的制剂是盐酸伊立替康注射液，在实际使用的过程中，该剂型逐渐暴露出一个问题：伊立替康的内酯环结构易水解，在pH>6条件下平衡快速向羧酸盐型方向转化。羧酸盐型的伊立替康药理活性低，毒性更强。生理条件（pH 7.4）下，由于血清蛋白优先与羧酸盐络合而使平衡偏向活性低的羧酸型，造成有效的内酯型比例过低，达到平衡时，“低效高毒”的羧酸盐形式化合物所占比重高达90%。
q中包裹的伊立替康以有效的内酯型为主，这也意味着伊立替康脂质体内水相pH偏酸性（pH6左右）。而众多文献及Onivyde专利文件实施例均表明外水相pH在近中性时更有利于脂质的稳定，Onivyde专利文件的实施例表明外水相pH在7.25左右时脂质长期稳定性比较好。这需要伊立替康脂质体外水相和内水相存在pH差异，同时外水相偏碱性的缓冲对不能在长期储存中进入内水相升高内水相pH，否则内水相中的伊立替康将会转化为“低效高毒”的羧酸盐形式。四、不易穿过脂质膜的羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）更适用于伊立替康脂质体
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用途细胞培养：HEPES在细胞培养中发挥着重要作用，能够维持培养液的pH稳定，提高细胞存活率。特别适用于长时间培养、开放环境培养以及对pH变化敏感的细胞系。生物和生化研究：由于HEPES具有稳定的pH控制能力和广泛的应用范围，它还被用于大多数金属离子的研究、环境和生物学研究、阳离子交换色谱中的缓冲液和洗脱液、植物研究、凝胶电泳中的缓冲液、电穿孔的缓冲液等。其他应用：此外，HEPES还用于哺乳动物细胞培养、体外受精和胚胎培养的缓冲液、二辛可宁酸（BCA）分析以及一些软骨两栖动物的研究等。湖南cas号7365-45-9HEPES大批量采购
